Restriktaas

Kasutatud lausetes (Bioloogia)

Selle metoodika loomise eelduseks oli omakorda restriktsiooniensüümide ehk restriktaaside (omapärased ensüümid, mis lõikavad DNA molekuli kaksikahelat kindlate järestuste kohalt) avastamine bakterites.
Restriktaas bakteritel esinev endonukleaaside hulka kuuluv ensüüm, mis katkestab DNA kaksikahela kindla nukleotiidijärjestuse kohalt.
Restriktaas -bakteritel esinev endonukleaaside hulka kuuluv ensüüm, mis katkestab DNA kaksikahela kindla nukleotiidijärjestuse kohalt, tekitades üheahelalised ,,kleepuvad" otsad; bakteritest on leitud palju restriktaase, millest igaüks tunneb ära oma spetsiifilise DNA-järjestuse.
Restriktaas (restriktsiooniensüüm) bakteritel esinev endonukleaaside hulka kuuluv ensüüm, mis katkestab DNA kaksikahela kindla nukleotiidijärjestuse kohalt, tekitades üheahelalised ,,kleepuvad" otsad; bakteritest on leitud palju restriktaase, millest igaüks tunneb ära oma spetsiifilise DNA-järjestuse.
Arber leidis, et T4 paljunemine on osades E.coli tüvedes restrikteeritud (piiratud) o E.coli tüve B rakkudes paljundatud faagi edasine paljunemine on takistatud tüve K rakkudes ja vastupidi o Rakus lagundatakse võõrast DNA-d, mis ei ole antud bakteritüve restriktaasi eest kaitstud o CRISPR – clustered, regulatory interspaced short palindromic repeats o Segment bakteriofaagi genoomist integreerub bakteri kromosoomi spetsiifilisse CRISPR lookusesse o CRISPR lookus sisaldab peaaegu identseid kordusjärjestusi ja nende vahele jäävaid vahealasid (spacers) , mis pärinevad erinevate viiruste genoomidest o CRISPR lookuselt transkribeeritud RNA (crRNA) ja CAS geenide poolt kodeeritud valkude vahel moodustub kompleks, mis seondub rakku nakatava viiruse genoomile ja lagundab selle 5.
Restriktaas ensüüm, mis katkestab DNA kaksikahela kindla nukleotiidjärjestuse kohalt, tekitades üheahelalised kleepuvad otsad.
Restriktaas- omapärane ensüüm, mis lõikab dna kaksikahelat kindlate järjestuste kohalt.
Restriktaas on ensüüm bakterites mis kaitseb neid viiruste eest.
4) Organismi teatud geeni töö peatatakse ning organism ei tooda enam vastavat ainet. (nt tomat, kartul) Rekombinantse DNA loomise restriktaastehnika rekombinantse DNA loomise restriktaastehnika sama restriktaas tunneb ära sama järjestuse DNA eri molekulides Restriktaas "lõikab" DNA ahelad pooleks nii, et tekivad "kleepuvate" otstega DNA lõigud Eri päritolu DNA lõigud viiakse lahuses kokku; lõigud ühinevad komplementaarsuse alusel; kleepuvate otste vahele tekivad vesiniksidemed Ensüüm ligaasi abil ühendatakse eri päritolu DNA lõigud omavahel kovalentsete sidemetega kokku - tekib rekombinantne DNA molekul Geeninokaut 1.
· Bakterid omavad võõra DNA vastu nn R/M süsteemi · toimub kahe ensüümi koostöö : restriktaas(R) mis lõikab DNA tükkideks ja metüültransferaan(M) mis metüleerib ära oma DNA ja kaitseb seega oma DNA-d lõhkumise eest.
Polümeraas seostub promootorpiirkonnaga ning transkriptsioon jätkub seni kuni RNA polümeraas jõuab stoppkoodonini  DNA lõikude liitmine - ligaas  DNA lõikamine kindla järjestuse juurest – restriktaas 5.
See on meie vahevektor ja see on väga hea kuna võimaldab sini-valge skriinimist ja seal on mõlemal pool EcoRV saiti EcoRI sait, ehk seda oli väga lihtne restriktaasidega lõigata.
Restriktaasid on ensüümid, mida toodavad bakterid enesekaitseks.
Kordamisküsimused Geenitehnoloogia I Restriktaasid.
TSÜTOSIIN 5-METÜÜLTSÜTOSIIN TÜMIIN Selleks, et eraldada selliseid saari ülejäänud genoomi suuresti A-T rikastest piirkondadest oleks sobiv kasutada restriktaasi, mis hüdrolüüsib C-G järjestusi (näiteks Cfr42I (SacII), CCGC'GG; NotI GC'GGCCGC;).
Selleks, et eraldada selliseid saari ülejäänud genoomi suuresti A-T rikastest piirkondadest oleks sobiv kasutada restriktaasi, mis hüdrolüüsib C-G järjestusi (näiteks Cfr42I (SacII), CCGC'GG; NotI GC'GGCCGC;).
Kevadel 2005 alustasid mitmed organisatsioonid taolise initsiatiiviga ka Eestis.5 Euroopa GMO-vabad regioonid: Iirima, Inglismaa, Luksemburg, Island, Belgia, Holland, Taani, Rootsi, Soome, Eesti, Läti, Leedu, Venemaa, Poola, Tsehhi, Slovakkia, Ungari, Gruusia, Rumeenia, Türgi, Bulgaaria, Küpros, Kreeka, Serbia-Montenegro, Horvaatia, Sloveenia, Malta, Itaalia, Austria, Sveits, Hispaania, Portugal, Prantsusmaa, Saksamaa.6 5 http://www.eko.org.ee/gmo/index.php 6 http://www.gmo-free-regions.org/ 8 GMO'de tootmine GMO'de saamiseks lõikab restriktaas (,,ensüümkäärid") DNA-d spetsiifilistest kohtadest, plasmiidist (rõngakujuline kaheahelaline DNA molekul) eraldatakse mittevajalikud geenid ja DNA ligaas (ensüüm, mis liidab DNA ahelate otsad) ühendab fragmendid.
restriktaas vektor Lõigatud DNA Restrikataas (sama) Lõigatud vektor Kleepuvad otsad ühinevad Rekombinantne plasmiid Kuidas geenid kohale viia?
Sama restriktaas (restriktsiooniesüüm) tunneb ära sama järjestuse DNA erimolekulides.
Restriktaasid on ensüümid, mida toodavad bakterid enesekaitseks – need lõikavad DNA lõikudeks, aga nii, et tekivad üheahelalised otsad – “kleepuvad otsad”.
Rekombinantse DNA tehnoloogiad - Plasmiidid - Restriktaasid - Transgeenid 2.
Geenitehnoloogia meetodeid:1.rakkudesse võõrgeeni sisseviimine2.geeni avaldumiseefektiivsuse muutumine3.nn knock-out-meetod e geeninokaut4.kloonimine. neist 1. ja3. on kaks põhilist viisi Sama restriktaas tunneb ära sana järjestuse DNA eri molekulides.
DNA lagundamine toimub nukleaaside abil (vt endonukleaas, eksonukleaas, restriktaas, apoptoos).
Powerpoindist võetud tabel: Ahelate lõikamise loogika üldiselt: Alguses: Peale hüdrolüüsimist: a - fosfodiestersideme 3' pool; b - fosfodiestersideme 5'-pool b) restriktaas ecorI (,,kleepuvaid" otsi produtseeriv endonukleaas) restriktaas ehk restriktsiooniensüüm kaitseb bakterit võõra DNA sissetungi eest.
Agrobakteriga, DNApüssiga või Restriktaastehnika: 1.
Geenivektor, selle loomise protsess, ligaas, restriktaas (ja tekkivad „kleepuvad otsad"), rekombinantne DNA.
Geenide ülekandmine on võimalik restriktaaside abil.
(Nimetage mõned teie arvates olulisemad) 1869 DNA avastamine 1953 kaksikheeliks 1969/70 ensüümid restriktaasid pcr 1989 Taq polümeraas kaksikheeliksite de- ja renaturatsioon nukleotiidide komplementaarsus 11.
restriktaas hindiii lõikab DNA-d järgmisest äratundmiskohast 5'AAGCTT3'.
restriktaasiga lõigatakse DNA lahti; 3.siiratakse DNA lõik 2.