Glaktosidaasi

Kasutatud lausetes (Bioloogia)

Transformeerimiseks:  Inaktiveerisin ligaasi, 10 min 5 juures. jooksul 70 C  Võtsin -80 C 5 juurest 10 min jääle sulama komptentsed rakud  Võtsin 20 µl rakke ja lisasin ligatsioonisegule ja inkubeerisin 30 min jääl  Teostasin Heat shocki: inkubeerisin 90 sek väitel 42 C 5 juures transfoneeritud segu, kohe tõstsin 2 minutiks jääle (membraaniaugu sulegemiseks)  Lisasin segule 500 µl vedelsöödet ja panin inkubeerima 30 min-ks inkubeerima 37 C 5 juures (et rakud jaguksid)  Tsentrifugeerisime bakterid põhja 3000 rpm 2 min ja rakupeal olev sööde valasin kraanikaussi Meie huvipakuvad bakterid nüüd sisaldavad ampitsiliiniresistentsus geeni ja ei sisalda glaktosidaasi – see on meie selektsiooni põhimõtte.

Kirjapilt.