Galaktosidaasi

Kasutatud lausetes (Bioloogia)

Lisaks sellele on vektoris palju erinevaid restriktsioonisaite, see võimaldab vektorisse sisestada erinevate restriktaasidega töödeldud otstega inserte. d) Plasmiid sisaldab lacZ operoni, mis kodeerib -galaktosidaasi.
46. pSTBlue-1 vektor sisaldab replikatsiooni vajaliku origini, antibiootikumiresistentsuse geeni ning ka lacZ operooni, mis annab bakterile lisatoitumisallika, kuna kodeerib β-galaktosidaasi. β-galaktosidaas lõhub β1-4 glükosiidsidet ja erinevaid substraate ette söötes saame kindlaks teha, millised meie kasutatud bakterikoloonuatest sisaldavad tühja plasmiidi ja millistel on insert seda ensüümi kodeeriva järjestuse „ära rikkunud“.
Mutatsioonid valku kodeerivates järjestustes: lacZ (galaktosidaas) knockout mutandid inhibeeritud samuti laktoosi permeaas (lacY) ja transatsetülaas (lacA). lacY (lactoosi permeaas)knockout mutandid inhibeerivad transatsetülaasi (lacA), kuid ei mõjuta galaktosidaasi (lacZ). lacA (transatsetülaas) knockout mutadid ei mõjuta ei galaktosidaasi (lacZ) ega laktoos permeaasi (lacY).
Juuretise koostises olevate mikroorganismide toodetud ensüümi (β-galaktosidaasi) toimel lõhustatakse laktoos glükoosiks ja galaktoosiks.
Nende substraatide lisamine on vajalik beta-galaktosidaasi ekspressiooniks, mis võimaldab identifitseerida bakteri kolooniad, mis sisaldavad rekombinantset plasmiidi (vt lisamaterjalid).
Meie valitud vektor sisaldab ka antibiootikumiresistentsuse geeni ka β-galaktosidaasi kodeerivat lacZ operooni.
LacZ geen kodeerib beeta-galaktosidaasi (lagundab laktoosi Glc-iks ja Gal-iks), mis on võimeline lagundama substraati X-gal, mille tulemusena tekib sinist värvi produkt bromokloroindool.
See takistab RNA-polümeraasi seostumist ning B-galaktosidaasi tootmist ei toimu (laktoosi rakkus on vähe).
Coli-laadsete bakterite puhul on substraadiks isopropl-.-D- tiogalaktopranosiid (IPTG) - kasutatakse .galaktosidaasi detekteerimiseks.
BGLB. β-galaktosidaasi testi.

Kirjapilt.